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按照物质在两相溶剂中分配比的不同,可以将中药化学成分分离方法主要归为液–液萃取法、PH萃取法、柱色谱法这三种,下面就来和帮考网一起看看这三种方法的具体介绍吧。
1.PH萃取法
PH萃取法也是液-液萃取分离的一种,分离原理是依据两相液体PH值大小不同达到分离目的。一般PH<3时,酸性物质多呈非解离状态(HA)、碱性物质则呈解离状态(BH+)存在;但pH>12时,则酸性物质呈解离状态(A- )、碱性物质则呈非解离状态(B)存在。据此,可在不同pH的缓冲溶液与有机溶剂中进行分配,使酸性、碱性、中性及两性物质得以分离。
2.柱色谱法
将两相溶剂中的一相涂覆在硅胶等多孔载体上,作为固定相,填充在色谱管中,然后加入与固定相不相混溶的另一相溶剂(流动相)冲洗色谱柱。物质在两相溶剂中相对作逆流移动,在移动过程中不断进行动态分配而得以分离。这种方法称之为液-液分配柱色谱法,所用的载体主要有硅胶、硅藻土及纤维素粉等。
通常,分离水溶性或极性较大的成分如生物碱、苷类、糖类、有机酸等化合物时,固定相多采用强极性溶剂(如水、缓冲溶液等),流动相则用三氯甲烷、乙酸乙酯、丁醇等弱极性有机溶剂,称之为正相色谱;但当分离脂溶性化合物,如高级脂肪酸、油脂、游离甾体等时,则两相可以颠倒,固定相可用石蜡油,而流动相则用水或甲醇等强极性溶剂,故称之为反相分配色谱。
常用反相硅胶薄层及柱色谱的填料系将普通硅胶经下列方式进行化学修饰,键合上长度不同的烃基(R)、形成亲油表面而成。根据烃基(–R)长度为乙基(–C2H5),还是辛基(–C8H17)或十八烷基(–Cl8H37),分别命名为RP-2、RP-8及RP-18。三者亲脂性强弱顺序为:RP-18> RP-8> RP-2。
3.液–液萃取法
液-液萃取法是根据物质在两相溶剂中的分配比不同进行分离,简称萃取法。
分离的难易用分离因子β值来表示。分离因子β可定义为A、B两种溶质在同一溶剂系统中分配系数的比值。就一般情况而言,β≥100,仅作一次简单萃取就可实现基本分离;如果100 >β≥10,通常须萃取10 ~12次;若β≤2时,要想实现基本分离,须作100次以上萃取才能完成;当β≌1时,则意味着两者性质极其相近,即使作任意次分配也无法实现分离。
纸色谱法的原理与液–液萃取法基本相同,只是两相中其中一相以固态为基质,与某种液相形成饱和状态,进而达到分离的目的。
以上三种方法各位小伙伴们都掌握了吗?小伙伴们要抓紧时间备考了,帮考网相信大家都能顺利通过考试。
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